咖啡可谓是当代打工人的续命神器，随之而来的“咖啡文化”，充满生活中每个时刻——无论在家里、办公室，或是各种社交场合，我们都能看到咖啡的身影。咖啡，逐渐与时尚、现代生活、工作和休闲娱乐联系在一起。
与此同时，与咖啡相关的科学研究也越来越多。以往的研究表明，喝咖啡不仅不会损害心脏，适量饮用还能大大降低心血管疾病的发病率，延年益寿。
近日，来自丹麦哥本哈根大学的一项研究表明：在咖啡中入牛奶，可以增强咖啡的抗炎作用，使免疫细胞的抗炎效果翻倍。该研究题为“Phenolic Acid-Amino Acid Adducts ExertDistinct Immunomodulatory Effects in Macrophages Compared to Parent PhenolicAcids”，发表在Journal of Agricultural and Food Chemistry杂志。
一、研究背景
当细菌、病毒或其他外来物质进入人体时，我们的免疫系统会通过部署白细胞和化学物质来保护我们，这种反应通称为「炎症」。
咖啡酸（CA）和绿原酸（CGA）是植物源性食品和饮料中常见的酚酸，它们与半胱氨酸（Cys）的对应加合物已在含咖啡的饮料中检测到。尽管有充分证明，CA和CGA具有抗氧化和抗炎活性，但Cys加合物（CA-Cys和CGA-Cys）的免疫调节活性尚不清楚。因此，科学家们合成了加合物，在脂多糖（LPS）处理的RAW 264.7细胞中研究了它们的免疫调节作用，并与母体酚酸的活性进行了比较。
之所以使用RAW 264.7细胞系，是因为大量研究表明，酚类化合物的生物活性在RAW 264.7细胞和原代人免疫细胞中相似。首先，研究人员研究了CA-Cys和CGA-Cys对细胞转录组反应的影响，以探索CA-Cys和CGA-Cys是否可以在转录水平上调节细胞信号传导。接着，通过研究PGE2生成、白细胞介素-6 （IL-6） 和 LPS 活化细胞中的肿瘤坏死因子-α （TNF-α）来比较CA-Cys，CGA-Cys与 CA 和 CGA 的抗炎活性。
二、研究方法
1、CA-Cys和CGA-Cys加合物的合成和纯化
CA和CGA的醌是使用高碘酸盐树脂生成的。将CA（或CGA）和Cys之间摩尔比为1：1的反应混合物在室温下搅拌并在磷酸盐缓冲液（pH 6.5）中搅拌24小时。此后，采用带有Eurospher 100-5 C18色谱柱（直径300 × 8 mm，5 μm颗粒）的半制备高效液相色谱（HPLC）系统进行纯化。将混合的馏分干燥并溶解在水中并储存在-20°C。CA–Cys和CGA–Cys储备溶液的浓度分别为204 μg/mL（相当于681.6 μM）和210 μg/mL（相当于443.6 μM）。CA-Cys和CGA-Cys的纯度（基于HPLC色谱图验证）分别为99.8%和99.7%。
2、细胞培养
RAW 264.7 巨噬细胞 （ATCC-TIB-71） 在 DMEM中培养，含有 10% 胎牛血清、100 U/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素。将细胞培养物保持在37°C，含5%CO2的环境中。